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    Pull Down Assay

    服務簡介

    GST-pull-down

    利用GST融合蛋白沉降技術,將靶蛋白與GST標簽蛋白進行融合表達,純化獲取融合表達蛋白。靶蛋白-GST融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的反比親和的支撐物,充當誘餌蛋白,目的蛋白溶液過柱純化,即可捕獲與之相互作用的俘獲蛋白,洗脫結合物,通過SDS-page電泳分析,或聯用WB和MS檢測,可驗證蛋白間的相互作用或篩選獲取相應的目的蛋白。

    RNA/DNA pull-down

    Pull down是檢測RNA/DNA結合蛋白與其靶RNA/DNA之間相互作用的主要實驗手段之一。用生物素標記RNA/DNA 探針,與胞漿蛋白提取液孵育,形成RNA/DNA—蛋白質復合物。該復合物可與鏈親和素標記的磁珠結合,從而與孵育液中的其他成分分離。復合物洗脫后,通過Western Blot實驗檢測特定的RNA/DNA結合蛋白是否與RNA/DNA相互作用,還可以對該蛋白進行質譜(MS)鑒定蛋白質類型。

    主要流程

    GST-pull-down

    構建GST-靶蛋白融合表達載體 WB檢測融合蛋白的表達 獲取總蛋白裂解液 GST-pull-down調取互作結合蛋白 對結合蛋白進行純化與分析

    RNA/DNA pull-down

    RNA/DNA生物素探針制備 細胞裂解液制備 .獲取總蛋白裂解液 pull-down調取互作結合蛋白 對結合蛋白進行純化與分析

    訂購信息

    服務項目

    說明

    周期

    報價

    GST-pull down

    通過磁珠結合捕獲,形成復合體形式,更加靈敏和針對性獲取結合蛋白:磁珠與GST抗體孵育結合,通過與樣品裂解液孵育,形成磁珠-GST抗體-GST融合蛋白-互作結合蛋白綜合體,進而純化獲取目的結合蛋白.

    8~10周

    詳細

    RNA pull down

    需要相關文獻及客戶的要求,根據基因序列進行DNA序列T克隆,做外轉錄成RNA,再進行生物素標記,與細胞裂解液結合分離結合蛋白。

    8周

    DNA pull down

    可以直接合成生物素標記DNA探針,與細胞裂解液結合,磁珠法篩選分離離結合蛋白。

    4~6周

    GST-pull-down

    客戶提供

    提供樣品
    1) 構建表達純化靶蛋白與相關誘餌蛋白(也可由公司構建)或含誘餌蛋白的細胞樣品
    2) 可用于WB檢測和IP實驗的GST標簽抗體

    最終交付

    交付結果
    1) 原始數據、結果圖片
    2) 標準實驗報告(含實驗步驟、流程及試劑耗材廠家)
     

    RNA/DNA pull-down

    客戶提供

    提供樣品
    1) 需檢測的細胞樣品
    提供信息
    1) 目的基因信息;
    2) 目的蛋白信息;
    3) 一抗及其說明書

    最終交付

    交付結果
    1) 原始數據、結果圖片
    2) 標準實驗報告(含實驗步驟、流程及試劑耗材廠家)
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